Ключевые результаты
Исследование показало, что использование буфера, содержащего β-меркаптоэтанол (BME), для элюирования антител при традиционной мультиплексной иммунофлуоресценции (mIF) может быть столь же эффективным, как и более современные методы на основе тирамид-сигнальной амплификации (TSA). Эффективность сопоставима при работе как с тканями после кратковременной, так и длительной фиксации в формалине.
Методология
Исследователи из Центра ресурсов тканей мозга Нового Южного Уэльса (BTRC) сравнивали эффективность модифицированных протоколов элюирования для традиционной mIF-окраски с методами на основе TSA. В качестве материала использовали посмертные образцы мозга пациентов с болезнью Альцгеймера. Основное внимание было уделено сравнению эффективности буфера с β-меркаптоэтанолом и стандартного метода демаскировки антигенов с помощью нагревания (heat-induced epitope retrieval).
Клиническое значение
Оптимизация методов мультиплексной иммунофлуоресценции для посмертных образцов мозга имеет важное значение для углубленного изучения патологических механизмов болезни Альцгеймера. Традиционные методы иммуностейнинга с хромогенами менее информативны для визуализации сложных клеточных взаимодействий, а качественная иммунофлуоресценция затруднена из-за аутофлуоресценции тканей мозга, особенно после длительного хранения в формалине.
Выводы
Несмотря на сопоставимую эффективность обоих методов, авторы отмечают, что при использовании традиционной mIF с итеративными сессиями визуализации между циклами элюирования существует более высокий риск несовпадения целевых молекул на составных изображениях. TSA-системы решают многие проблемы с комбинациями первичных и вторичных антител, но остаются дорогостоящими в исполнении.
Применение буфера с β-меркаптоэтанолом представляет собой перспективный подход к оптимизации протоколов mIF для исследования патологии болезни Альцгеймера на посмертных образцах человеческого мозга.